E-Selectin/CD62E/SELE CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400452

概要

SELEは、誘導型の内皮細胞接着分子であるE-セレクチン（CD62E）をコードしており、TNF-αやIL-1βなどの炎症性サイトカインによって迅速に発現が増加します。E-セレクチンは、白血球上のシアル化・フコシル化リガンド（シアリルLewis^x など）に結合することで、活性化内皮上でのテザリング（係留）とローリング（転がり）を仲介し、白血球接着カスケードおよび血管内皮通過移動の開始に関与します。SELEの機能はNF-κBにより駆動される炎症シグナルと交差し、組織炎症や免疫監視を形作る血管における白血球リクルートを制御します。E-セレクチンの発現異常は慢性炎症状態や血管病変と関連し、腫瘍—内皮相互作用や、転移に関連する血管外遊走モデルにおいても頻繁に研究されています。

E-Selectin/CD62E/SELE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSELE遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SELE内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SELEのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、E-Selectin/CD62E/SELEタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、E-Selectin/CD62E/SELEシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SELE欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• E-Selectin/CD62E/SELEの機能に不可欠なSELEエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SELEゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• E-Selectin/CD62E/SELE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびE-Selectin/CD62E/SELE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SELE遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  E-Selectin/CD62E/SELE HDRプラスミド（h）および E-Selectin/CD62E/SELE HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSELEホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSELE標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。