E-Selectin/CD62E/SELE Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400452

Descripción general

SELE codifica la E-selectina (CD62E), una molécula de adhesión endotelial inducible que se sobreexpresa rápidamente en respuesta a citocinas inflamatorias como TNF-α e IL-1β. Al unirse a ligandos sialilados y fucosilados (incluida sialil-Lewis^x) en los leucocitos, la E-selectina media el anclaje y el rodamiento sobre el endotelio activado, iniciando la cascada de adhesión leucocitaria y la migración transendotelial. La función de SELE se integra con la señalización inflamatoria impulsada por NF-κB y regula el reclutamiento vascular de leucocitos, que moldea la inflamación tisular y la vigilancia inmunitaria. La expresión desregulada de E-selectina se asocia con estados inflamatorios crónicos y patología vascular, y se estudia con frecuencia en interacciones tumor–endotelio y en modelos de extravasación relevantes para la metástasis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO E-Selectin/CD62E/SELE (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SELE en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SELE junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SELE tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína E-Selectin/CD62E/SELE.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SELE para la investigación de la señalización de E-Selectin/CD62E/SELE, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SELE críticos para la función de E-Selectin/CD62E/SELE
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SELE para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido E-Selectin/CD62E/SELE CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido E-Selectin/CD62E/SELE CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SELE. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR E-Selectin/CD62E/SELE (h) y el plásmido HDR E-Selectin/CD62E/SELE (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SELE para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SELE definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.