dsg2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400957-ACT

Desmoglein-2 (DSG2; dsg2) ist ein calciumabhängiges desmosomales Cadherin, das in Epithelgeweben und in den Glanzstreifen (interkalierten Discs) des Herzens eine starke Zell-Zell-Adhäsion vermittelt. Durch die Kopplung extrazellulärer Cadherin-Interaktionen an zytoplasmatisches Plakoglobin/Plakophiline und Desmoplakin verankert DSG2 Intermediärfilamente und unterstützt so die Integrität von Zellkontakten, Mechanotransduktion und Barrierefunktion. Die DSG2-abhängige Organisation von Desmosomen steht in Wechselwirkung mit Signalwegen, die die epitheliale Differenzierung, kollektive Zellmigration und Stressantworten auf mechanische Belastung steuern. Eine veränderte DSG2-Expression oder -Funktion wird mit einem Umbau der Desmosomen in Verbindung gebracht und wurde sowohl im Kontext der arrhythmogenen Kardiomyopathie als auch der epithelialen Tumorbiologie untersucht, wo Änderungen der Adhäsion die Gewebearchitektur und Signalzustände beeinflussen können.

dsg2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DSG2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

dsg2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DSG2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DSG2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen dsg2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DSG2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von dsg2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des dsg2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DSG2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.