dsg1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401442-NIC

Desmoglein-1 (DSG1; dsg1) ist ein calciumabhängiges desmosomales Cadherin, das in mehrschichtigen Epithelien eine starke Zell-Zell-Adhäsion vermittelt, den Aufbau von Desmosomen mitorganisiert und zur Aufrechterhaltung der Integrität der epidermalen Barriere beiträgt. Durch die Kopplung an Plakoglobin, Plakophiline und Desmoplakin verbindet DSG1 interzelluläre Kontaktstellen mit dem Keratin-Zwischenfilamentnetzwerk und unterstützt so die Gewebewiderstandsfähigkeit unter mechanischer Belastung. Die Funktion von DSG1 steht zudem in Wechselwirkung mit epithelialen Differenzierungsprogrammen und Prozessen des junctionalen Remodellings, die Signale über Signalwege wie EGFR/MAPK sowie Antworten auf entzündliche Reize beeinflussen. Eine veränderte Expression oder Funktion von DSG1 ist mit Defekten der Hautbarriere sowie desmosomenbedingten Blasenbildungs- und Keratodermaphänotypen assoziiert und macht DSG1 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien zu Adhäsion und epidermaler Homöostase.

dsg1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DSG1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DSG1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DSG1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DSG1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.