dsg1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401442

Übersicht

DSG1 kodiert Desmoglein‑1 (dsg1), ein desmosomales Adhäsionsprotein aus der Cadherin‑Familie, das die Zell‑Zell‑Verbindungen in mehrschichtigen Epithelien stärkt und die Integrität der epidermalen Barriere unterstützt. Durch die Kopplung an Plakoglobin, Plakophiline und Desmoplakin verknüpft DSG1 die interzelluläre Adhäsion mit Netzwerken aus Intermediärfilamenten und koordiniert Differenzierung, mechanische Belastbarkeit und Gewebemorphogenese. Störungen der DSG1‑abhängigen Desmosomenassemblierung können die Signalübertragung von Keratinozyten, den Umbau von Zellkontakten und Stressantworten verändern. Eine genetische oder erworbene Dysfunktion von DSG1 ist mit erhöhter Hautfragilität und entzündlichen Phänotypen assoziiert und macht DSG1 zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung der epithelialen Homöostase und von Krankheitsmechanismen.

Das dsg1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DSG1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DSG1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DSG1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die dsg1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DSG1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der dsg1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DSG1-Exone abzielen, die für die dsg1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DSG1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom dsg1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom dsg1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DSG1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das dsg1 HDR-Plasmid (h) und dsg1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DSG1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DSG1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.