dsg1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401442-ACT

DSG1 kodiert Desmoglein‑1, ein calciumabhängiges desmosomales Cadherin, das eine starke Zell‑Zell‑Adhäsion in geschichteten Epithelien vermittelt und zur Aufrechterhaltung der Integrität der epidermalen Barriere beiträgt. dsg1 ist an der Assemblierung von Desmosomen sowie an der Verankerung von Intermediärfilamenten beteiligt und koordiniert so den Gewebezusammenhalt mit Differenzierungsprogrammen von Keratinozyten. Über seine strukturellen Aufgaben hinaus sind DSG1‑assoziierte Adhäsionskomplexe mit Signalwegen verknüpft, die die epidermale Homöostase und Stressantworten beeinflussen. Eine veränderte DSG1‑Expression oder ‑Funktion wurde mit blasenbildenden Hauterkrankungen und inflammatorischen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig in Modellen epithelialer Fragilität und gestörter Differenzierung untersucht.

dsg1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DSG1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

dsg1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DSG1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DSG1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen dsg1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DSG1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von dsg1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des dsg1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DSG1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.