DSC3 Double Nickase Plasmid (h): sc-404696-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DSC3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DSC3 Double-Nickase-Plasmid (h) und DSC3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DSC3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DSC3: sc-81806
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DSC3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404696-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DSC3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404696-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **DSC3** kodiert **Desmocollin-3**, ein calciumabhängiges Cadherin, das den adhäsiven Kern von Desmosomen in mehrschichtigen Epithelien bildet. DSC3 wirkt mit Desmogleinen und zytoplasmatischen Plaque-Proteinen zusammen, um Intermediärfilamente zu verankern und die Gewebeintegrität aufrechtzuerhalten. Es trägt zu Signalwegen bei, die den Aufbau von Zell-Zell-Kontakten, die epitheliale Differenzierung und Reaktionen auf mechanischen Stress steuern. Eine veränderte DSC3-Expression oder eine desmosomale Dysfunktion wird mit einer beeinträchtigten Barrierefunktion, Veränderungen von Zellzusammenhalt und Motilität sowie epithelialen Krankheitsphänotypen in Verbindung gebracht, darunter krebsassoziierte Progression und entzündliche Hauterkrankungen. Da Desmosomen Schnittstellen zu Zytoskelett-Remodellierung und Signalnetzwerken bilden, wird DSC3 häufig in der Kontaktbiologie, der epithelialen Homöostase und der adhäsionsabhängigen Regulation der Genexpression untersucht.
DSC3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DSC3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DSC3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DSC3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DSC3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.