DOCK 8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401727

Übersicht

DOCK8 kodiert einen Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor, der Rho-Familien-GTPasen aktiviert und so den Umbau des Aktinzytoskeletts koordiniert, der für Migration und Adhäsion von Immunzellen sowie für die Bildung der immunologischen Synapse erforderlich ist. DOCK8 unterstützt das Überleben und die Signalübertragung in Lymphozyten und beeinflusst dabei Prozesse wie Chemotaxis, antigengetriebene Aktivierung und zytotoxische Effektor-Funktionen. Störungen von DOCK8 sind mit primären Immundefizienz-Phänotypen verknüpft, die durch beeinträchtigte antivirale Antworten, allergische Entzündungen und eine erhöhte Anfälligkeit für Malignome gekennzeichnet sind, was seine zentrale Rolle in der Immunhomöostase unterstreicht. In mechanistischen Studien wird DOCK8 häufig in Signalwegen untersucht, die die Zytoskelettdynamik, die Zellpolarität und die Stabilität der immunologischen Synapse in T-Zellen, B-Zellen, NK-Zellen und dendritischen Zellen steuern.

Das DOCK 8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DOCK8-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DOCK8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DOCK8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DOCK 8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DOCK8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DOCK 8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DOCK8-Exone abzielen, die für die DOCK 8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DOCK8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DOCK 8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DOCK 8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DOCK8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DOCK 8 HDR-Plasmid (h) und DOCK 8 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DOCK8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DOCK8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.