Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DNA Ligase I Double Nickase Plasmid (h): sc-402830-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DNA Ligase I Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DNA Ligase I Double-Nickase-Plasmid (h) und DNA Ligase I Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LIG1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DNA Ligase I: sc-271678
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DNA Ligase I Double Nickase Plasmid (h) | sc-402830-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DNA Ligase I Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402830-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Human LIG1 kodiert die DNA-Ligase I, eine ATP-abhängige Ligase, die Einzelstrangbrüche schließt, indem sie während der Synthese des Folgestrangs Okazaki-Fragmente verknüpft und die ligierende Schließung von DNA-Nicks im Rahmen von Reparaturprozessen abschließt. DNA-Ligase I wirkt an der Schnittstelle zwischen Replikation und mehreren DNA-Reparaturwegen, darunter die Long-Patch-Basenexzisionsreparatur sowie die Auflösung von DNA-Strangunterbrechungen, die bei der Verarbeitung von DNA-Schäden entstehen. Eine korrekte LIG1-Aktivität unterstützt die Genomstabilität, den Fortschritt der Replikationsgabel und die Zellzyklus-Integrität; eine Störung ist mit erhöhtem Replikationsstress und Mutagenese assoziiert. Eine veränderte Ligationkapazität wurde mit Phänotypen genomischer Instabilität in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie und erbliche Syndrome mit DNA-Reparaturdefekten relevant sind, wodurch LIG1 ein nützlicher Knotenpunkt für die Untersuchung von DNA-Erhaltungsmechanismen ist.
DNA Ligase I Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LIG1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LIG1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LIG1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LIG1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.