DNA Ligase I Plasmide Double Nickase (h): sc-402830-NIC

Il gene umano **LIG1** codifica la **DNA ligasi I**, una ligasi ATP-dipendente che sigilla le rotture a singolo filamento unendo i frammenti di Okazaki durante la sintesi del filamento ritardato e completando la ligazione dei nick del DNA associata ai processi di riparazione. La DNA ligasi I opera all’interfaccia tra la replicazione e molteplici vie di riparazione del DNA, tra cui la riparazione per escissione di basi a patch lungo (long-patch BER) e la risoluzione delle discontinuità del filamento di DNA che insorgono durante l’elaborazione del danno al DNA. Una corretta attività di LIG1 sostiene la stabilità del genoma, la progressione della forcella replicativa e la fedeltà del ciclo cellulare; la sua alterazione è associata a un aumento dello stress replicativo e della mutagenesi. Una capacità di ligazione modificata è stata implicata in fenotipi di instabilità genomica rilevanti per la biologia del cancro e per sindromi ereditarie da difetto di riparazione del DNA, rendendo LIG1 un nodo utile per studiare i meccanismi di mantenimento del DNA.

DNA Ligase I Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LIG1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LIG1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LIG1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LIG1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.