Dkk-3 Double Nickase Plasmid (m): sc-424494-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Dkk-3 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Dkk-3 Double-Nickase-Plasmid (m) und Dkk-3 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Dkk3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Dkk-3 Double Nickase Plasmid (m) | sc-424494-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dkk-3 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-424494-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Dickkopf-verwandte Protein 3 (Dkk-3) ist ein sezerniertes Glykoprotein, das extrazelluläre Signalprozesse moduliert, mit kontextabhängigen Effekten auf die Wnt/β‑Catenin-Aktivität sowie breiterer Wechselwirkung mit Signalwegen, die Zellschicksalsentscheidungen steuern. In Mausgeweben wurde die Dkk3-Expression mit der Regulation von Proliferation, Differenzierung und Gewebeumbau in Verbindung gebracht, einschließlich Effekten auf stromal‑epitheliale Interaktionen und immunologische Mikroumgebungen. Veränderte Dkk3-Spiegel werden in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten beschrieben, etwa in der Tumorbiologie, bei Fibrose sowie beim metabolischen oder kardiovaskulären Remodeling, wo Verschiebungen in Wnt-assoziierten Transkriptionsprogrammen Zellzustandsübergänge beeinflussen können. Diese Eigenschaften machen Dkk3 zu einem hilfreichen Knotenpunkt, um parakrine Signalgebung und Signalwegdynamiken in mechanistischen Modellen zu untersuchen.
Dkk-3 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Dkk3-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Dkk3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Dkk3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Dkk3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.