Particules Lentivirales d'Activation (h) DGAT1: sc-401735-LAC

DGAT1 (diacylglycérol O-acyltransférase 1) est une enzyme membranaire du réticulum endoplasmique qui catalyse l’étape terminale et irréversible de la synthèse des triacylglycérols en acylant le diacylglycérol à partir de substrats acyl‑CoA. Elle agit à l’interface entre la biogenèse des gouttelettes lipidiques, l’absorption intestinale des lipides et le stockage énergétique cellulaire, en modulant le renouvellement des triglycérides et les réservoirs de lipides de signalisation. L’activité de DGAT1 influence la prise en charge des acides gras et les réponses au stress lipotoxique, et elle est fréquemment étudiée dans le cadre du remodelage des voies métaboliques associé à l’obésité, à la résistance à l’insuline, à la stéatose hépatique non alcoolique et aux dyslipidémies. En biologie du cancer et en recherche sur l’inflammation, le stockage des lipides neutres dépendant de DGAT1 sert à examiner comment les cellules tamponnent l’excès d’acides gras et régulent la composition lipidique des membranes.

Les particules d'activation lentivirales DGAT1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de DGAT1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales DGAT1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription DGAT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de DGAT1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif DGAT1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.