Desmuslin Double Nickase Plasmid (h): sc-409241-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Desmuslin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Desmuslin Double-Nickase-Plasmid (h) und Desmuslin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SYNM abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Desmuslin: sc-374484
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Desmuslin Double Nickase Plasmid (h) | sc-409241-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Desmuslin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-409241-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SYNM kodiert Desmuslin, ein intermediärfilament-assoziiertes Protein, das in quergestreifter Muskulatur angereichert ist und dort zur Organisation des Zytoskelettnetzwerks sowie zur Aufrechterhaltung der strukturellen Integrität an Z-Scheiben und Costameren beiträgt. Desmuslin ist an Signalwegen beteiligt, die die Verankerung des Zytoskeletts, die Mechanotransduktion und die Kraftübertragung steuern, indem es Filamentsysteme mit membranassoziierten Komplexen verbindet. Störungen von SYNM wurden mit myofibrillärer Desorganisation und veränderter Stabilität von Muskelfasern in Verbindung gebracht, was es für die Untersuchung zytoskelettabhängiger Stressantworten relevant macht. Als gerüstartige Komponente der Muskelarchitektur wird Desmuslin häufig in Modellen der Kardiomyopathie und der Skelettmyopathie untersucht, um zu verstehen, wie Netzwerke aus Intermediärfilamenten die zelluläre Widerstandsfähigkeit erhalten.
Desmuslin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SYNM-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SYNM abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SYNM-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SYNM-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.