Desmin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400248

Übersicht

DES kodiert Desmin, ein Intermediärfilamentprotein vom Typ III, das ein essenzielles zytoskelettales Gerüst in Herz-, Skelett- und glatten Muskelzellen bildet. Desmin integriert sich in Z-Scheiben-Strukturen und verbindet Myofibrillen mit Mitochondrien, Zellkernen und dem Sarkolemm, wodurch Mechanotransduktion, Organellenpositionierung und die Integrität der Kontraktilität unterstützt werden. Es ist an der Organisation des Zytoskeletts sowie an Stressantwortprozessen beteiligt, die die Stabilität und das Remodeling von Muskelzellen beeinflussen. Störungen von DES stehen in Zusammenhang mit desmin-assoziierten Myopathien und Kardiomyopathien, die durch Proteinaggregation und eine fortschreitende Muskeldysfunktion gekennzeichnet sind, was DES für Studien zur Proteostase und zu Mechanismen der Muskeldegeneration relevant macht.

Das Desmin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DES-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DES-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DES nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Desmin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DES-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Desmin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DES-Exone abzielen, die für die Desmin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DES-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Desmin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Desmin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DES-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Desmin HDR-Plasmid (h) und Desmin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DES-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DES-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.