Dermatopontin Double Nickase Plasmid (h): sc-402924-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Dermatopontin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Dermatopontin Double-Nickase-Plasmid (h) und Dermatopontin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DPT abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Dermatopontin: sc-376863
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Dermatopontin Double Nickase Plasmid (h) | sc-402924-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dermatopontin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402924-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane DPT kodiert Dermatopontin, ein extrazelluläres Matrixprotein, das in Bindegeweben angereichert ist und die Kollagenfibrillogenese, den Matrixaufbau sowie die Zell–Matrix-Adhäsion moduliert. Dermatopontin beeinflusst den Signalaustausch zwischen extrazellulärer Matrix und Zellen und wirkt sich über Interaktionen mit Matrixkomponenten und Wachstumsfaktor-Signalwegen auf Prozesse wie Wundheilung, Fibroblastenaktivität und Gewebeumbau aus. Eine veränderte DPT-Expression wurde mit fibroseassoziiertem Remodeling und Veränderungen der Tumormikroumgebung in Verbindung gebracht, bei denen Organisation und Steifigkeit der extrazellulären Matrix das Zellverhalten beeinflussen können. Als Matrixregulator wird DPT häufig in Studien zu Mechanismen untersucht, die die Stromabiologie, Angiogenese und entzündliche Antworten im Zusammenhang mit dem Umsatz der extrazellulären Matrix steuern.
Dermatopontin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DPT-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DPT abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DPT-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DPT-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.