Dermatopontin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402924-ACT

O DPT humano codifica a dermatopontina, uma proteína da matriz extracelular (MEC) que se liga a colágenos e “decora” redes fibrilares, influenciando a organização da matriz, a adesão célula–matriz e as propriedades biomecânicas dos tecidos conjuntivos. A dermatopontina contribui para o comportamento dos fibroblastos e para a remodelação da MEC ao modular interações entre fibrilas de colágeno, proteoglicanos e recetores da superfície celular, sustentando processos como a reparação de feridas e a arquitetura do estroma. Alterações na expressão de DPT e na composição da MEC são frequentemente investigadas em contextos de fibrose, estroma associado a tumores e remodelação vascular ou dérmica, nos quais mudanças na organização do colágeno e na adesão celular afetam a função dos tecidos. Como regulador associado à matriz, o DPT também é relevante para estudos de remodelação conduzida por TGF-β e para programas transcricionais mais amplos ligados à mecanotransdução.

Dermatopontin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DPT sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dermatopontin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DPT em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DPT, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dermatopontin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DPT nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dermatopontin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dermatopontin em células tumorais com expressão de DPT silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.