Derlin-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404762-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Derlin-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Derlin-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Derlin-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DERL1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ?:
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Derlin-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404762-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Derlin-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404762-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **DERL1** kodiert **Derlin-1**, ein multipassiges ER-Membranprotein, das an der **ER-assoziierten Degradation (ERAD)** beteiligt ist, indem es die Retrotranslokation fehlgefalteter oder überschüssiger luminaler und membranständiger Proteine ins Zytosol zur Ubiquitinierung und zum proteasomalen Abbau erleichtert. Derlin-1 wirkt innerhalb von Netzwerken der ER-Proteinqualitätskontrolle gemeinsam mit E3-Ubiquitin-Ligasen und dem p97/VCP-ATPase-Komplex und verbindet so die Proteostase mit der unfolded-protein response sowie der ER-Stress-Signalgebung. Eine veränderte DERL1-Aktivität wurde in Zusammenhängen von chronischem ER-Stress, dysregulierter Proteom-Umsatzkontrolle und zellulärer Anpassung an proteotoxische Bedingungen untersucht. Als zentrale ERAD-Komponente bietet Derlin-1 einen mechanistischen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie die Homöostase des sekretorischen Wegs Entzündung, Stoffwechsel und stressassoziierte Phänotypen beeinflusst.
Derlin-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DERL1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DERL1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DERL1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DERL1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.