Plasmide CRISPR d'Activation (h) DDX36: sc-404744-ACT

DHX36 code pour l’hélicase ARN/ADN humaine DDX36, une hélicase de type DEAH-box qui se lie préférentiellement aux structures en G-quadruplex et les résout, à la fois dans l’ARN et dans l’ADN. En déroulant ces structures secondaires, DDX36 contribue à réguler des programmes transcriptionnels et post-transcriptionnels, notamment le turnover des ARNm, la traduction et le maintien de la stabilité du génome. Cette protéine a été associée au contrôle de la prolifération cellulaire et de l’expression de gènes sensibles au stress, des processus souvent perturbés dans le cancer et d’autres maladies où la régulation médiée par les G-quadruplex est altérée. La fonction de DDX36 est également pertinente pour les voies qui gouvernent le métabolisme de l’ARN et la surveillance des acides nucléiques, lesquelles modulent la signalisation oncogénique et les états de différenciation cellulaire.

DDX36 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DHX36 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DDX36 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DHX36 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DHX36, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DDX36. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DHX36 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DDX36 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DDX36 dans les cellules tumorales présentant une expression de DHX36 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.