DDX27 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-409574-ACT

DDX27 kodiert eine nukleoläre DEAD-Box-RNA-Helikase, die an der Prozessierung von Prä‑rRNA und der Ribosomenbiogenese beteiligt ist und damit die effiziente Assemblierung großer ribosomaler Untereinheiten sowie die globale Translationskapazität unterstützt. Durch das Remodelling von RNA‑Protein‑Komplexen im Nukleolus trägt DDX27 zur Regulation von Zellwachstums- und Proliferationsprogrammen bei, die von einer strikt kontrollierten Proteinsynthese abhängen. Störungen der Ribosomenproduktion und der nukleolären Homöostase sind mit zellulären Stress-Signalwegen und veränderter Differenzierung verknüpft, wodurch DDX27 für Studien zu Ribosomopathien und krebsassoziierter translationaler Umprogrammierung relevant ist. Eine aberrante DDX27‑Aktivität wurde in Modellsystemen mit proliferativen Phänotypen sowie Defekten in myogenen und entwicklungsbezogenen Prozessen in Verbindung gebracht, was seinen Einsatz als mechanistischen Knotenpunkt in der Forschung zum RNA‑Metabolismus untermauert.

DDX27 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DDX27-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

DDX27 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DDX27-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DDX27-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DDX27-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DDX27-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DDX27-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DDX27-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DDX27-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.