DDR1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400517-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DDR1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DDR1 Double-Nickase-Plasmid (h) und DDR1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DDR1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DDR1: sc-374618
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DDR1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400517-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DDR1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400517-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DDR1 (Discoidin-Domänen-Rezeptor 1) ist eine durch Kollagen aktivierte Rezeptor-Tyrosinkinase, die als Sensor der extrazellulären Matrix fungiert und die Bindung von Kollagen mit der intrazellulären Signalübertragung verknüpft. Nach Aktivierung durchläuft DDR1 eine Autophosphorylierung und vermittelt Signalwege, die an Zelladhäsion, Zytoskelett-Umbau, Migration und Überleben beteiligt sind; zudem ist eine Wechselwirkung mit MAPK/ERK-, PI3K–AKT- und Fokalkontakt-Signalen beschrieben. Die DDR1-Aktivität trägt in der normalen Gewebehomöostase zur Regulation epithelial-stromaler Interaktionen, zur Organisation der Basalmembran und zum Matrix-Remodeling bei. Eine veränderte DDR1-Expression oder -Signalgebung wurde mit Fibrose sowie tumorassoziierter Invasion und Metastasierung in Verbindung gebracht, was DDR1 zu einem relevanten Knotenpunkt für die Untersuchung mikroenvironmentgetriebener Phänotypen macht.
DDR1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DDR1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DDR1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DDR1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DDR1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.