Plasmide Double Nickase (m) DDC: sc-419967-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) DDC correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DDC Double Nickase (m) et le plasmide DDC Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ddc. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DDC Antibody (8E8): sc-293287
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) DDC | sc-419967-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin Ddc code l’aromatic L‑amino acid decarboxylase (DDC), une enzyme dépendante du phosphate de pyridoxal qui convertit la L‑DOPA en dopamine et le 5‑hydroxytryptophane en sérotonine, la plaçant à un carrefour clé de la biosynthèse des neurotransmetteurs catécholaminergiques et indolaminergiques. L’activité de la DDC soutient la neurotransmission monoaminergique et des signaux neuromodulateurs qui influencent le développement neuronal, la plasticité synaptique et la régulation neuroendocrinienne. Dans les systèmes nerveux central et périphérique, l’expression de Ddc contribue au flux métabolique des voies de la dopamine et de la sérotonine, avec des effets en aval sur le transport vésiculaire, la signalisation des récepteurs et l’équilibre du stress oxydatif. Une altération de la fonction de la DDC ou de la disponibilité des monoamines est pertinente dans des modèles expérimentaux de phénotypes moteurs et affectifs, ainsi que dans des études des processus neurodéveloppementaux et neurodégénératifs dépendants des neurotransmetteurs.
DDC Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ddc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ddc. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ddc. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ddc.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.