DcpS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407308

Übersicht

DCPS kodiert das humane Scavenger-Decapping-Enzym DcpS, eine Histidin-Triad-(HIT)-Hydrolase, die verbleibende Cap-Strukturen spaltet, die während des 3′→5′-mRNA-Abbaus entstehen. Dadurch werden cap-abgeleitete Metabolite recycelt und die Homöostase des RNA-Umsatzes unterstützt. Durch die Hydrolyse von Cap-Dinukleotiden wie m7GpppN ergänzt DcpS zytoplasmatische und nukleäre RNA-Qualitätskontrollprozesse und fördert eine effiziente Kopplung von mRNA-Abbau und Nukleotid-Rückgewinnung. Eine veränderte DCPS-Aktivität kann die Stabilität des Transkriptoms und die RNA-Überwachung stören und verbindet diesen Signalweg mit Phänotypen, die mit fehlregulierten Genexpressionsprogrammen einhergehen. Daher wird DCPS häufig im Zusammenhang mit RNA-Metabolismus, stressadaptiven transkriptionellen Antworten und Mechanismen untersucht, die die Kinetik des mRNA-Abbaus prägen.

Das DcpS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DCPS-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DCPS-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DCPS nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DcpS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DCPS-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DcpS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DCPS-Exone abzielen, die für die DcpS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DCPS-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DcpS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DcpS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DCPS-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DcpS HDR-Plasmid (h) und DcpS HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DCPS-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DCPS-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.