DcpS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407308

Panoramica

DCPS codifica l’enzima umano DcpS di “scavenger decapping”, un’idrolasi della triade dell’istidina (HIT) che scinde le strutture residue del cappuccio generate durante il decadimento dell’mRNA 3′→5′, riciclando i metaboliti derivati dal cap e contribuendo a mantenere l’omeostasi del turnover dell’RNA. Idrolizzando dinucleotidi del cap come m7GpppN, DcpS integra i processi di controllo qualità dell’RNA nel citoplasma e nel nucleo e favorisce un efficiente accoppiamento tra degradazione dell’mRNA e recupero dei nucleotidi. Alterazioni dell’attività di DCPS possono perturbare la stabilità del trascrittoma e la sorveglianza dell’RNA, collegando questa via a fenotipi associati a programmi di espressione genica deregolati. Di conseguenza, DCPS è spesso studiato nel contesto del metabolismo dell’RNA, delle risposte trascrizionali adattative allo stress e dei meccanismi che determinano la cinetica del decadimento dell’mRNA.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DcpS (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DCPS in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DCPS insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DCPS a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DcpS.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DCPS per lo studio della segnalazione di DcpS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DCPS critici per la funzione di DcpS
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DCPS per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DcpS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DcpS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DCPS. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DcpS Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DcpS (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DCPS per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DCPS definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.