DACH1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404712

Übersicht

DACH1 (Dachshund-Familie, Transkriptionsfaktor 1) ist ein nukleärer, DNA-bindender Regulator, der an Zellschicksalsentscheidungen und Programmen der Gewebedifferenzierung beteiligt ist und eine wichtige Rolle in entwicklungsbiologischen Signalwegen spielt. In menschlichen Zellen moduliert DACH1 Transkriptionsnetzwerke, die mit der Kontrolle der Proliferation, der Aufrechterhaltung epithelialer Linien und der Zellmigration verknüpft sind, einschließlich Wechselwirkungen mit der Hormonrezeptor-Signalgebung und anderen Transkriptionsfaktor-Schaltkreisen. Eine veränderte DACH1-Expression oder regulatorische Aktivität wurde mit Veränderungen tumorsuppressiver Phänotypen in Verbindung gebracht und beeinflusst Prozesse wie Zellzyklusprogression, Invasion und die Expression metastasenbezogener Gene. Seine kontextabhängige Funktion macht DACH1 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um das Gleichgewicht von Transkriptionsrepression und -aktivierung sowie das Umverdrahten von Signalwegen in krankheitsrelevanten Modellen zu untersuchen.

Das DACH1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DACH1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DACH1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DACH1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DACH1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DACH1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DACH1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DACH1-Exone abzielen, die für die DACH1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DACH1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DACH1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DACH1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DACH1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DACH1 HDR-Plasmid (h) und DACH1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DACH1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DACH1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.