CYYR1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404421-ACT

Humanes CYYR1 (cystein- und tyrosinreiches Protein 1) kodiert ein kleines, niedrig-komplexes, cystein-/tyrosinangereichertes Protein, das an der Regulation zellulärer Signalübertragung und stressadaptiver transkriptioneller Programme beteiligt ist. Es wurde berichtet, dass die Expression von CYYR1 auf entzündliche Stimuli und zellulären Stress anspricht, was auf eine Rolle bei der Koordination von Signalweg-Crosstalk hindeutet, der die Organisation des Zytoskeletts, adhesionsassoziierte Signalgebung und kontextabhängige Genexpression beeinflusst. Als potenzieller Modulator stimulusinduzierter Transkriptionsantworten ist CYYR1 von Interesse, um Mechanismen zu untersuchen, die extrazelluläre Signale mit nachgeschalteten regulatorischen Netzwerken koppeln. Eine dysregulierte CYYR1-Expression wurde in krankheitsassoziierten Expressionsprofilen beobachtet, was seine Eignung als Forschungsziel in Studien zu entzündungsassoziierten Phänotypen und tumorassoziierten Signalzuständen unterstreicht.

CYYR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CYYR1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CYYR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CYYR1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CYYR1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CYYR1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CYYR1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CYYR1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CYYR1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CYYR1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.