The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
cystatin A双切口酶质粒(h): sc-416374-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- cystatin A 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- cystatin A双切酶质粒（h）和cystatin A双切酶质粒（h2）编码针对CSTA的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：cystatin A: sc-376759，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
cystatin A双切口酶质粒(h) | sc-416374-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
cystatin A双切口酶质粒(h2) | sc-416374-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CSTA 编码半胱氨酸抑制蛋白A（cystatin A），属于I型半胱氨酸蛋白酶抑制剂，可在细胞质及细胞周边抑制组织蛋白酶（cathepsin）的活性，从而有助于维持上皮屏障完整性并实现受控的蛋白质周转。通过调节溶酶体内及溶酶体外的蛋白水解过程，半胱氨酸抑制蛋白A会影响角质形成细胞分化、脱屑以及对蛋白酶介导应激的保护等过程。CSTA 表达失调或与其靶向组织蛋白酶之间的平衡被打破，与组织稳态改变及炎症性微环境相关，并在鳞状上皮癌与皮肤疾病中有报道关联。作为一种人源 cystatin，它也常用于研究蛋白酶–抗蛋白酶网络，这些网络塑造细胞侵袭、抗原加工以及细胞死亡通路等过程。
cystatin A 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 CSTA 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对CSTA内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏CSTA的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了CSTA基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。