CYP8B1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403383-NIC

CYP8B1は、古典的胆汁酸生合成経路における重要な水酸化反応段階を触媒する、小胞体局在のシトクロムP450酵素であるステロール12α-ヒドロキシラーゼをコードし、コール酸とケノデオキシコール酸の比率に影響を与えます。この作用を通じて、CYP8B1は肝臓の胆汁酸プールの性状を形成し、その結果として腸肝循環、脂質吸収、さらにFXRやTGR5などの胆汁酸応答性核内受容体およびGPCR経路を介した代謝シグナル伝達に影響します。CYP8B1の発現量または活性の変化は、胆汁酸組成の破綻や、肝臓研究および心代謝研究に関連するより広範な代謝表現型と関連づけられています。そのためCYP8B1は、肝代謝、胆汁酸シグナル伝達ネットワーク、ならびに肝細胞および関連モデル系における遺伝子—環境相互作用の機序解明研究に有用な標的です。

CYP8B1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CYP8B1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CYP8B1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CYP8B1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CYP8B1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。