Plásmido Doble Nickase (h) CUG-BP1: sc-401383-NIC

CELF1 codifica CUG-BP1, una proteína de unión a ARN que regula el empalme alternativo, la estabilidad del ARNm y la traducción mediante el reconocimiento de elementos ricos en GU en los transcritos diana. Coordina la regulación génica postranscripcional en procesos como el control del ciclo celular, las respuestas al estrés y la diferenciación, en conexión con las vías de procesamiento de ARN y la dinámica citoplasmática de los complejos mRNP. La actividad desregulada de CELF1 se ha asociado con programas de empalme incorrecto del ARN y con una proteostasis alterada, con relevancia para trastornos que implican toxicidad de ARN asociada a repeticiones y otras alteraciones más amplias en la regulación del transcriptoma. En células humanas, las redes dependientes de CUG-BP1 ofrecen un punto de entrada abordable para dilucidar cómo el empalme y el recambio de ARN moldean el fenotipo.

CUG-BP1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CELF1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CELF1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CELF1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CELF1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.