Partículas Lentivirales de Activación (h) CTLA-4: sc-400948-LAC

CTLA4 codifica CTLA-4, un receptor inhibidor de punto de control inmunitario expresado predominantemente en células T activadas y células T reguladoras, que limita la activación inicial de las células T al competir con CD28 por los ligandos CD80/CD86 en las células presentadoras de antígeno. Al atenuar la señalización costimulatoria proximal del TCR y de CD28, CTLA-4 influye en la actividad de las vías PI3K–AKT y NF-κB, en la producción de citocinas y en el mantenimiento de la tolerancia periférica. La alteración de la expresión o la función de CTLA-4 se ha vinculado con fenotipos de desregulación inmunitaria, incluidos la autoinmunidad y el deterioro de la homeostasis inmunitaria, lo que lo convierte en un nodo clave para estudiar los umbrales de activación de las células T y la biología de las células T reguladoras. CTLA-4 también es relevante para la investigación en inmunología tumoral, donde las vías de puntos de control modulan las respuestas inmunitarias antitumorales y los mecanismos de evasión inmunitaria.

Las partículas de activación lentiviral CTLA-4 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CTLA4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CTLA-4 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CTLA4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CTLA-4. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CTLA4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.