Plasmide Double Nickase (h) CTLA-4: sc-400948-NIC

CTLA4 code pour CTLA-4, un récepteur inhibiteur de point de contrôle immunitaire exprimé principalement par les lymphocytes T activés et les lymphocytes T régulateurs, qui limite l’amorçage des lymphocytes T en entrant en compétition avec CD28 pour la liaison à CD80/CD86 sur les cellules présentatrices d’antigène. En atténuant la signalisation proximale du TCR et les programmes transcriptionnels en aval dépendants de PI3K–AKT et de NF-κB, CTLA-4 contribue au maintien de la tolérance périphérique et limite une production excessive de cytokines. Des perturbations génétiques ou fonctionnelles de CTLA-4 sont associées à une dérégulation immunitaire et à l’auto-immunité, et une activité altérée de CTLA4 peut influencer les mécanismes d’échappement immunitaire tumoral au sein du microenvironnement tumoral. CTLA4 est donc largement étudié dans les voies qui régissent les seuils d’activation des lymphocytes T, la fonction suppressive des Treg et l’homéostasie lymphocytaire.

CTLA-4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CTLA4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CTLA4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CTLA4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CTLA4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.