Plásmido Doble Nickase (h) CSN1: sc-404934-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CSN1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CSN1 (h) y el plásmido de doble nickasa CSN1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GPS1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CSN1 Anticuerpo (E-4): sc-514086
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CSN1 | sc-404934-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CSN1 | sc-404934-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El GPS1 humano codifica la subunidad 1 del signalosoma COP9 (CSN1), un componente central del signalosoma COP9 que regula las ligasas de ubiquitina tipo cullin-RING al controlar la neddilación de las cullinas y coordinar el recambio de proteínas dependiente de ubiquitina. A través de esta actividad, CSN1 influye en la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la señalización por estrés, intersectando con vías como MAPK y NF-κB que moldean los programas transcripcionales y la proteostasis. La alteración de la función del signalosoma COP9 se ha vinculado con una estabilidad modificada de reguladores clave, incluidas ciclinas y factores de transcripción, lo que contribuye a una proliferación desregulada y a defectos en el mantenimiento del genoma. Por ello, GPS1/CSN1 es de interés para estudios mecanísticos en biología del cáncer, señalización relacionada con la inflamación e investigaciones más amplias sobre el control de la vía ubiquitina–proteasoma.
CSN1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GPS1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GPS1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GPS1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GPS1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.