Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Lentiviral Activation Particles (m): sc-432122-LAC

Das murine Nlrp3-Gen kodiert Cryopyrin (NALP3/NLRP3), einen zytosolischen Mustererkennungsrezeptor, der als zentraler Sensor für vielfältige Gefahrensignale und sterilen Stress dient. Nach Aktivierung initiiert NLRP3 die Assemblierung des Inflammasoms mit ASC und Pro-Caspase-1, was zur Aktivierung von Caspase-1, zur Reifung von IL-1β und IL-18 sowie zu pyroptotischem Zelltod über Gasdermin D führt. Dieser Signalweg verknüpft Ionenflüsse, mitochondriale Dysfunktion, lysosomale Ruptur und reaktive Sauerstoffspezies mit der angeborenen Immunantwort und nachgeschalteten Zytokinprogrammen. Eine fehlregulierte NLRP3-Aktivität wird häufig als mechanistischer Ansatzpunkt genutzt, um entzündliche Pathologien zu untersuchen, darunter autoinflammatorische Phänotypen, metabolische Entzündung, Neuroinflammation sowie Wirtsantworten auf Infektionen in murinen Modellen.

Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Nlrp3-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Cryopyrin/NALP3/NLRP3 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Nlrp3-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Cryopyrin/NALP3/NLRP3-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Nlrp3-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.