CPTI-M CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419787

Übersicht

Cpt1b kodiert die Muskel-Isoform der Carnitin-Palmitoyltransferase 1 (CPTI-M), ein Enzym der äußeren Mitochondrienmembran, das den Eintritt langkettiger Fettsäuren in die Mitochondrien steuert, indem es Acylcarnitine erzeugt. Als geschwindigkeitsbestimmender Schritt der mitochondrialen β-Oxidation verknüpft CPTI-M die Lipidverwertung mit der zellulären Energiehomöostase und steht in funktioneller Wechselwirkung mit der Malonyl‑CoA‑Regulation, der AMPK-Signalübertragung und umfassenderen, PPAR-gesteuerten Stoffwechselprogrammen. In Mausstörungen mit hoher oxidativer Nachfrage prägt die Cpt1b-Aktivität die Substratwahl, die mitochondriale Funktion und die Verteilung von Lipiden. Veränderte, CPTI-M-abhängige Flussraten werden häufig im Kontext von Stoffwechselstörungen, Insulinsensitivität sowie lipidassoziierten Myopathien und kardiometabolischen Phänotypen untersucht.

Das CPTI-M CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cpt1b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cpt1b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cpt1b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CPTI-M-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cpt1b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CPTI-M-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cpt1b-Exone abzielen, die für die CPTI-M-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cpt1b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CPTI-M CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CPTI-M CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cpt1b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CPTI-M HDR-Plasmid (m) und CPTI-M HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cpt1b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cpt1b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.