CPS2 CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-403519

개요

CAD는 세포질에 존재하는 다기능 효소 복합체를 암호화하며, de novo 피리미딘 생합성의 최초 ‘커밋’ 단계(되돌리기 어려운 초기 단계)를 촉매합니다. 이 과정에서 CPS2(카바모일-인산 합성효소 2)는 글루타민과 중탄산염을 UMP 생성 경로로 전환하는 반응을 시작합니다. 이러한 활성은 DNA 복제, RNA 전사, 막 인지질 합성에 필요한 뉴클레오타이드 풀의 항상성을 유지하는 데 기여하며, CAD의 기능을 세포주기 진행과 대사 적응과 연결합니다. CAD는 PRPP에 의한 알로스테릭 조절과 UTP에 의한 피드백 억제 등 영양분 및 성장 신호 경로에 의해 조절되고, MAPK/mTOR 신호 하류의 인산화에 의해서도 조절됩니다. 피리미딘 대사의 이상과 CAD 활성 변화는 여러 질환 맥락에서 관찰되는 증식성 표현형 및 대사 재프로그래밍과 연관되어 있어, CAD는 뉴클레오타이드 스트레스 반응과 게놈 유지 기전을 연구하는 데 유용한 핵심 노드로 간주됩니다.

CPS2 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 CAD 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 CAD 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 CAD의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 CPS2 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 CPS2 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 CAD 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• CPS2 기능에 중요한 CAD 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 CAD 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• CPS2 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 CPS2 CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 CAD 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  CPS2 HDR 플라스미드 (h) 및 CPS2 HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 CAD 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 CAD 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.