Plasmide Double Nickase (h) CPOX: sc-405130-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CPOX correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CPOX Double Nickase (h) et le plasmide CPOX Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CPOX. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CPOX Antibody (B-9): sc-393388
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CPOX | sc-405130-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CPOX | sc-405130-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **CPOX** code la coproporphyrinogène oxydase, une enzyme mitochondriale qui catalyse la décarboxylation oxydative du coproporphyrinogène III en protoporphyrinogène IX dans la voie de biosynthèse de l’hème. Cette étape relie l’utilisation cellulaire du fer, le métabolisme redox mitochondrial et la synthèse de l’hème nécessaire aux hémoprotéines impliquées dans la phosphorylation oxydative et les réactions de détoxification. Une activité altérée de CPOX perturbe l’homéostasie des porphyrines et peut entraîner l’accumulation d’intermédiaires porphyriniques associée à une photosensibilité et à des manifestations neuroviscérales dans des phénotypes liés aux porphyries. CPOX est donc largement étudié en biologie mitochondriale, lors de la différenciation érythroïde et dans les réponses au stress métabolique qui influencent la signalisation dépendante de l’hème.
CPOX Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CPOX dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CPOX. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CPOX. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CPOX.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.