CPI-17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401966

Übersicht

PPP1R14A kodiert CPI-17, einen phosphorylierungsabhängigen Inhibitor der Myosin‑Leichtkettenphosphatase (MLCP), der kontraktile Signalwege verstärkt, indem er die Phosphorylierung der regulatorischen Myosin‑Leichtkette stabilisiert. Nach Phosphorylierung durch Kinasen wie PKC sowie Rho‑assoziierte Signalwege hemmt CPI‑17 die katalytische Aktivität von PP1 innerhalb der MLCP und reguliert dadurch den Tonus der glatten Muskulatur, die Zytoskelettdynamik und die Kalziumsensitivierung. Dieser Regulationsknoten verknüpft GPCR‑ und RhoA/ROCK‑Signale mit Aktomyosin‑Remodeling und Programmen der Zellmotilität. Eine fehlregulierte PPP1R14A/CPI‑17‑Aktivität wurde mit abnormer Kontraktilität der glatten Muskulatur und proliferativen Remodeling‑Prozessen in Verbindung gebracht, was seine Untersuchung in Modellen der kardiovaskulären, Atemwegs‑ und gastrointestinalen Pathophysiologie unterstützt.

Das CPI-17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PPP1R14A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PPP1R14A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PPP1R14A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CPI-17-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PPP1R14A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CPI-17-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PPP1R14A-Exone abzielen, die für die CPI-17-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PPP1R14A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CPI-17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CPI-17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PPP1R14A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CPI-17 HDR-Plasmid (h) und CPI-17 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PPP1R14A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PPP1R14A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.