Plásmido Doble Nickase (h) CPEB: sc-402685-NIC

CPEB1 codifica la proteína de unión a elementos de poliadenilación citoplasmática (CPEB), un regulador de unión a ARN que controla la longitud de la cola poli(A) del ARNm y el momento de su traducción mediante el reconocimiento de elementos de poliadenilación citoplasmática en las regiones 3′ UTR. Al coordinar la traducción dependiente de la poliadenilación, CPEB1 contribuye a programas de regulación génica posranscripcional que moldean la progresión del ciclo celular, la diferenciación y la plasticidad sináptica neuronal. La actividad de CPEB1 se integra con vías de señalización que modulan la dinámica de los gránulos de ARN y la traducción local, influyendo en la remodelación del proteoma en respuesta a señales del desarrollo y del estrés. La desregulación del control traduccional mediado por CPEB1 se ha asociado con estados alterados de proliferación y diferenciación, y se ha estudiado en el contexto de la biología del cáncer y la neurobiología, donde la regulación del ARN se ve perturbada con frecuencia.

CPEB El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CPEB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CPEB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CPEB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CPEB1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.