CoREST Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402066-ACT

RCOR1 codifica a CoREST, um correpressor transcricional central que serve de plataforma para complexos de modificação de cromatina contendo REST, HDAC1/2 e LSD1/KDM1A, regulando a acetilação de histonas próxima ao promotor e os estados de metilação de H3K4. Por meio dessas interações, a CoREST coordena o controlo epigenético de programas génicos neuronais, da diferenciação e da manutenção da identidade celular, ao mesmo tempo que influencia redes transcricionais relacionadas com o ciclo celular e a resposta ao stress. A atividade desregulada de RCOR1/CoREST tem sido implicada em programas aberrantes de repressão da cromatina observados em contextos de neurodesenvolvimento e neurodegeneração e em cancros, nos quais a remodelação epigenética sustenta estados de linhagem alterados. Como regulador nodal da repressão transcricional, o RCOR1 é frequentemente estudado em vias que ligam a arquitetura da cromatina à plasticidade da expressão génica.

CoREST O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RCOR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CoREST O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RCOR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RCOR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CoREST. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RCOR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CoREST no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CoREST em células tumorais com expressão de RCOR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.