Plasmide CRISPR/Cas9 KO Contactin 3 (m): sc-422111

Présentation

Cntn3 code la contactine 3, une molécule d’adhérence cellulaire de la superfamille des immunoglobulines, enrichie dans le système nerveux et ancrée à la membrane par un GPI, qui favorise la croissance des neurites, le guidage axonal et l’organisation des synapses. La contactine 3 participe, à la surface des neurones, à des interactions avec la famille contactine–L1 et avec des récepteurs, façonnant la reconnaissance cellule–cellule et l’assemblage des circuits au cours du développement et de la maturation. Par ses rôles dans la signalisation dépendante de l’adhérence et l’organisation des microdomaines membranaires, CNTN3 influence des programmes de connectivité et de plasticité pertinents pour des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques. La Cntn3 de la souris constitue donc un point d’entrée utile pour disséquer les déterminants moléculaires de la spécificité du câblage et du remodelage des réseaux dépendant de l’activité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Contactin 3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cntn3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cntn3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cntn3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Contactin 3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cntn3 pour l'étude de la signalisation de Contactin 3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cntn3 essentiels à la fonction de Contactin 3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cntn3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Contactin 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Contactin 3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cntn3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Contactin 3 plasmide HDR (m) et le Contactin 3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cntn3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cntn3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.