connexin 62 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405882

Übersicht

GJA10 kodiert Connexin 62, eine Untereinheit von Gap-Junction-Kanälen, die sich zu Connexonen zusammenlagert und so den direkten interzellulären Austausch von Ionen und kleinen Metaboliten ermöglicht. Die durch Connexine vermittelte Kopplung unterstützt die elektrische und metabolische Synchronisierung und trägt zu Prozessen wie der Gewebehomöostase, der Koordination des Zellzyklus und der Reaktion auf zellulären Stress über eine regulierte Permeabilität der Zellkontakte bei. Veränderte Connexin-Expression oder eine veränderte Kanal-Gating-Regulation wird häufig mit gestörter Zell-Zell-Kommunikation in Verbindung gebracht, mit nachgelagerten Effekten auf Differenzierungsprogramme und Signalnetzwerke, einschließlich der Calcium-Dynamik und kinaseabhängiger Signalwege. Als Mitglied der Connexin-Familie bietet Connexin 62 einen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie der Umbau von Gap Junctions krankheitsrelevante Phänotypen in menschlichen Zellen beeinflusst.

Das connexin 62 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GJA10-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GJA10-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GJA10 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die connexin 62-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GJA10-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der connexin 62-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GJA10-Exone abzielen, die für die connexin 62-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GJA10-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom connexin 62 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom connexin 62 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GJA10-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das connexin 62 HDR-Plasmid (h) und connexin 62 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GJA10-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GJA10-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.