Plasmide Double Nickase (h) connexin 46: sc-403947-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) connexin 46 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide connexin 46 Double Nickase (h) et le plasmide connexin 46 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GJA3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: connexin 46 Antibody (C-3): sc-365394
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) connexin 46 | sc-403947-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) connexin 46 | sc-403947-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GJA3 code la connexine 46, une protéine de jonction gap enrichie dans le cristallin, qui s’assemble en hémicanaux et en canaux intercellulaires afin de permettre le transfert direct, de cellule à cellule, d’ions et de petits métabolites. La connexine 46 soutient la différenciation et l’homéostasie des cellules des fibres du cristallin en contribuant au système de microcirculation du cristallin, en coordonnant l’équilibre rédox et en maintenant l’équilibre ionique et osmotique. En régulant la communication jonctionnelle et la perméabilité des hémicanaux, elle influence la gestion du calcium, la signalisation de l’ATP et les réponses au stress cellulaire dans un tissu oculaire avasculaire. Une altération de la fonction de GJA3 est associée à des phénotypes de cataracte héréditaire, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier les mécanismes de transparence du cristallin et le contrôle qualité des protéines dans l’environnement oculaire.
connexin 46 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GJA3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GJA3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GJA3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GJA3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.