COL6A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401069

Übersicht

COL6A1 kodiert die Kollagen-Typ-VI-Alpha-1-Kette, einen zentralen Bestandteil der Kollagen-VI-Mikrofibrillen, die sich in der extrazellulären Matrix zusammenlagern und zur Zugfestigkeit von Geweben sowie zur Zell‑Matrix‑Adhäsion beitragen. Kollagen‑VI‑Netzwerke koordinieren die Organisation der extrazellulären Matrix und beeinflussen die Mechanotransduktion, Überlebenssignale und die zelluläre Differenzierung in Bindegeweben; funktionelle Verknüpfungen bestehen zu integrinvermittelten Signalwegen und zur Stabilität der Basalmembran. Eine veränderte COL6A1-Expression oder Matrixeinlagerung kann das Remodeling der extrazellulären Matrix und die Stromastruktur stören und dadurch die Integrität von Muskelfasern sowie das Verhalten von Fibroblasten beeinflussen. Eine Fehlregulation von Kollagen VI wurde mit neuromuskulären und bindegewebigen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird zudem im Kontext von Fibrose und tumorassoziiertem Matrix‑Remodeling untersucht.

Das COL6A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des COL6A1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des COL6A1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von COL6A1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die COL6A1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von COL6A1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der COL6A1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf COL6A1-Exone abzielen, die für die COL6A1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere COL6A1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom COL6A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom COL6A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des COL6A1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das COL6A1 HDR-Plasmid (h) und COL6A1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von COL6A1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten COL6A1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.