Plásmido CRISPR de Activación (h) COL1A2: sc-400598-ACT

COL1A2 codifica la cadena pro‑α2(I) del colágeno tipo I, un colágeno fibrilar principal que se ensambla en heterotrímeros y aporta resistencia a la tracción a los tejidos conectivos, incluidos la dermis, los tendones, el hueso y el estroma vascular. Su expresión está estrictamente regulada durante el depósito y la remodelación de la matriz extracelular (MEC), e integra la señalización de TGF‑β/SMAD, la adhesión mediada por integrinas y las vías de fibrilogénesis del colágeno que modelan la arquitectura tisular y la mecanotransducción. La transcripción desregulada de COL1A2 o las variantes patogénicas alteran el ensamblaje del colágeno y la homeostasis de la matriz, contribuyendo a trastornos hereditarios del tejido conectivo y a fenotipos de remodelación fibrótica. En investigación biomédica, COL1A2 actúa como un marcador y efector clave de la activación de los fibroblastos, el recambio de la MEC y las contribuciones del estroma a la inflamación y a los microambientes tumorales.

COL1A2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de COL1A2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

COL1A2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus COL1A2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional COL1A2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de COL1A2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo COL1A2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de COL1A2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía COL1A2 en células tumorales con expresión de COL1A2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.