CNTF Plasmide Double Nickase (h): sc-402471-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CNTF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CNTF Double Nickase Plasmid (h) e il CNTF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CNTF. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CNTF Antibody (A-11): sc-25286
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CNTF Plasmide Double Nickase (h) | sc-402471-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CNTF Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402471-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il fattore neurotrofico ciliare (CNTF) è una citochina secreta della famiglia dell’IL-6 che sostiene la sopravvivenza neuronale e la differenziazione gliale, ed è attiva anche nei tessuti metabolici. Il CNTF trasduce il segnale attraverso un complesso recettoriale tripartito composto da CNTFRα insieme a LIFR e gp130, attivando la via JAK/STAT—soprattutto STAT3—oltre alle vie MAPK/ERK e PI3K/AKT, per modulare programmi trascrizionali coinvolti nelle risposte allo stress e nelle decisioni di destino cellulare. Nei sistemi umani, un’alterazione della segnalazione del CNTF è stata studiata nel contesto della neurodegenerazione, della neuroinfiammazione e del mantenimento delle cellule retiniche, nonché come modulatore dell’equilibrio energetico e della biologia degli adipociti. Questi legami funzionali rendono il CNTF un nodo utile per indagare la segnalazione trofica guidata dalle citochine e il cross-talk tra tessuti neurali e periferici.
CNTF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CNTF nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CNTF. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CNTF. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CNTF interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.