CLN3 Double Nickase Plasmid (h): sc-404501-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CLN3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CLN3 Double-Nickase-Plasmid (h) und CLN3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CLN3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CLN3: sc-398192
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CLN3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404501-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CLN3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404501-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CLN3 kodiert ein multipassierendes lysosomales/endosomales Membranprotein, das an der Regulation des vesikulären Transports, der Lysosomenhomöostase und der Funktion des Autophagie‑Lysosom‑Signalwegs beteiligt ist. Das humane CLN3 steht mit der Aufrechterhaltung des lysosomalen pH-Werts, der Membranzusammensetzung und dem Abbau bzw. der Entfernung von Makromolekülen in Verbindung und ist damit an Stressantworten und der zellulären Proteostase beteiligt. Eine Störung von CLN3 beeinträchtigt die endolysosomale Dynamik, mit nachgelagerten Effekten auf den Lipidstoffwechsel, die mitochondriale Funktion und neuroinflammatorische Signalwege in besonders vulnerablen Zelltypen. Pathogene Varianten in CLN3 sind mit der juvenilen neuronalen Ceroid-Lipofuszinose (Batten-Krankheit) assoziiert, wodurch CLN3 ein zentrales Ziel für mechanistische Untersuchungen lysosomaler Dysfunktion und neurodegenerationsrelevanter Signalwege darstellt.
CLN3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CLN3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CLN3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CLN3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CLN3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.