Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CLK1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402793-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CLK1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CLK1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CLK1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CLK1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CLK1: sc-515897
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CLK1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402793-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CLK1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402793-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane CLK1 (CDC-like Kinase 1) ist eine Dual-Specificity-Kinase, die Serin/Arginin-reiche (SR-)Proteine und andere Spleißfaktoren phosphoryliert, um die Dynamik des Spleißosoms und das alternative prä-mRNA-Spleißen zu regulieren. Durch die Modulation der Exon-Inklusion, der RNA-Prozessierung und nachgeschalteter Transkript-Isoformen beeinflusst CLK1 die Progression des Zellzyklus, Stressantworten und Transkriptionsprogramme, die mit proliferativen Signalwegen verknüpft sind. Die CLK1-Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen des RNA-Metabolismus und Netzwerken der posttranskriptionellen Genregulation, die die Proteomvielfalt in unterschiedlichen Geweben prägen. Eine Fehlregulation der durch CLK1 vermittelten Spleißkontrolle wurde mit aberranten Isoform-Expressionsmustern in der Krebsbiologie und in der Forschung zu neurologischen Erkrankungen in Verbindung gebracht, was CLK1 als mechanistischen Knotenpunkt für die Untersuchung spleißabhängiger Phänotypen stützt.
CLK1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CLK1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CLK1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CLK1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CLK1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.