CLIP-170 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401279-ACT

Il gene umano **CLIP1** codifica **CLIP-170**, una proteina citoplasmatica che “traccia” l’estremità plus dei microtubuli, si lega alle loro estremità e le collega a carichi cellulari e a siti corticali. CLIP-170 coordina la dinamica dei microtubuli, la cattura dei cinetocori e le interazioni con il complesso dineina–dynactina e altri complessi +TIP, sostenendo il trasporto intracellulare, l’organizzazione del fuso mitotico e la polarità cellulare. Attraverso questi ruoli, CLIP1 contribuisce a processi quali la progressione mitotica e la migrazione direzionale, con una regolazione alterata dei microtubuli e reti di traffico intracellulare spesso implicate nel comportamento delle cellule tumorali e nelle disfunzioni del neurosviluppo. CLIP-170 è quindi ampiamente studiata nelle vie che regolano il rimodellamento del citoscheletro, la segregazione cromosomica e il posizionamento degli organelli.

CLIP-170 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CLIP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CLIP-170 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CLIP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CLIP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CLIP-170. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CLIP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CLIP-170 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CLIP-170 nelle cellule tumorali con espressione di CLIP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.