Plasmide CRISPR d'Activation (h) CLCA1: sc-402998-ACT

La CLCA1 humaine (chloride channel accessory 1) est une glycoprotéine sécrétée associée aux mucines, exprimée principalement dans les épithéliums des voies respiratoires et de l’intestin, où elle module le transport ionique épithélial, l’hydratation du mucus et la fonction de barrière. CLCA1 influence indirectement la conductance des canaux chlorure activés par le calcium et est liée à la différenciation des cellules caliciformes ainsi qu’à des programmes de signalisation inflammatoire dans les tissus muqueux. Son expression suit les processus de remodelage épithélial et a été associée à l’hypersécrétion de mucus dans les voies aériennes et à l’inflammation allergique, ainsi qu’à des états épithéliaux dérégulés dans des contextes de maladies gastro-intestinales. Parce que CLCA1 est étroitement couplée à la biologie des mucines et à la différenciation épithéliale, elle constitue un marqueur utile et un nœud mécanistique pour étudier les transitions des lignages sécrétoires et les interactions immunitaires au niveau des muqueuses.

CLCA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CLCA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CLCA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CLCA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CLCA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CLCA1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CLCA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CLCA1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CLCA1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CLCA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.