claudin-18 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404431

Descripción general

CLDN18 codifica la claudina-18, una proteína tetraspan de las uniones estrechas que contribuye a la función de barrera paracelular y a la polaridad epitelial en contextos específicos de tejido, incluidos los epitelios gástrico y pulmonar. Al organizar las hebras de las uniones estrechas junto con otras claudinas y proteínas de andamiaje como los miembros de la familia ZO, la claudina-18 ayuda a regular la integridad de la unión, la selectividad iónica y la señalización vinculada a la dinámica del citoesqueleto. La expresión alterada de CLDN18 o su localización en las uniones se asocia con la remodelación epitelial y la desregulación de la homeostasis de la barrera, procesos a menudo relacionados con la inflamación y la biología tumoral. CLDN18 también se ha estudiado en el contexto de eventos de fusión y programas de linaje que afectan la adhesión celular y los estados de diferenciación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO claudin-18 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CLDN18 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CLDN18 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CLDN18 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína claudin-18.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CLDN18 para la investigación de la señalización de claudin-18, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CLDN18 críticos para la función de claudin-18
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CLDN18 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido claudin-18 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido claudin-18 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CLDN18. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR claudin-18 (h) y el plásmido HDR claudin-18 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CLDN18 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CLDN18 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.