claudin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400609

概要

CLDN1は、タイトジャンクションのストランドを構成する膜貫通タンパク質であるクローディン-1をコードしており、上皮バリアの完全性、傍細胞透過性、ならびに頂端‐基底極性の制御に関与します。クローディン-1は、ZO-1などの足場タンパク質との相互作用を介してジャンクションの構築やシグナル伝達に関わり、細胞骨格ダイナミクスや、Wnt/β-カテニン経路およびEMT関連プログラムを含む上皮恒常性に結び付く経路に影響を与えます。CLDN1の発現量や局在の変化は、バリア機能不全や炎症過程と関連し、複数の癌腫における上皮の形質転換、浸潤、転移の文脈で頻繁に研究されています。ジャンクションを規定する因子として、クローディン-1は接着依存的シグナル伝達や組織構築を解析するためのマーカー、ならびに機構解明上の重要な結節点として広く用いられています。

claudin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCLDN1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CLDN1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CLDN1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、claudin-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、claudin-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CLDN1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• claudin-1の機能に不可欠なCLDN1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CLDN1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• claudin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびclaudin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CLDN1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  claudin-1 HDRプラスミド（h）および claudin-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCLDN1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCLDN1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。