Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Clathrin Light Chain B/CLTB Double Nickase Plasmid (h): sc-404228-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Clathrin Light Chain B/CLTB Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Clathrin Light Chain B/CLTB Double-Nickase-Plasmid (h) und Clathrin Light Chain B/CLTB Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CLTB abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Clathrin Light Chain B/CLTB: sc-376414
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Clathrin Light Chain B/CLTB Double Nickase Plasmid (h) | sc-404228-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Clathrin Light Chain B/CLTB Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404228-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CLTB kodiert die Clathrin-Leichtkette B, eine Kernkomponente clathrinbeschichteter Vesikel, die während der Endozytose und des post-Golgi-Transports die Assemblierung und Krümmung von Clathrin-Gittern reguliert. Durch die Modulation der Dynamik beschichteter Gruben (coated pits) und von Adapter-Interaktionen trägt CLTB zur Internalisierung von Rezeptoren, zum Zyklus synaptischer Vesikel und zur Sortierung von Membranproteinen entlang endosomaler Transportwege bei. Clathrin-vermittelter Transport beeinflusst Signaltransduktion und Nährstoffaufnahme und verknüpft damit CLTB-abhängigen vesikulären Verkehr mit zellulärer Homöostase und Stressantworten. Fehlregulierte endozytotische Transportprozesse und Störungen der Funktion beschichteter Vesikel werden mit Krebsbiologie, Neurobiologie und Wirt–Pathogen-Interaktionen in Verbindung gebracht, was CLTB zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien des Membrantransports macht.
Clathrin Light Chain B/CLTB Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CLTB-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CLTB abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CLTB-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CLTB-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.