Clathrin Light Chain B/CLTB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404228

Übersicht

CLTB kodiert die Clathrin-Leichtkette B, eine regulatorische Untereinheit des Clathrin-Triskelions, die während der clathrinvermittelten Endozytose den Aufbau der Hülle, die Dynamik des Gitters und die Interaktionen mit Adaptoren moduliert. Über seine Rolle bei der Vesikelbildung an der Plasmamembran und am trans-Golgi-Netzwerk unterstützt CLTB die Internalisierung von Rezeptoren, das Recycling synaptischer Vesikel sowie die Sortierung von Membranproteinen, die nachgeschaltete Signalwege und die Nährstoffaufnahme beeinflussen. Das CLTB-abhängige Trafficking ist mit dem endosomalen Recycling und der lysosomalen Weiterleitung verknüpft und prägt damit die Verweildauer von Rezeptoren sowie die Sensitivität von Signalwegen. Eine fehlregulierte Funktion der Clathrin-Hülle und ein veränderter endozytotischer Flux werden häufig mit veränderter Signaltransduktion und Proteostase-Phänotypen in Verbindung gebracht, wie sie in der Krebsbiologie und in Modellen neurodegenerativer Erkrankungen untersucht werden.

Das Clathrin Light Chain B/CLTB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CLTB-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CLTB-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CLTB nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Clathrin Light Chain B/CLTB-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CLTB-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Clathrin Light Chain B/CLTB-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CLTB-Exone abzielen, die für die Clathrin Light Chain B/CLTB-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CLTB-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Clathrin Light Chain B/CLTB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Clathrin Light Chain B/CLTB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CLTB-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Clathrin Light Chain B/CLTB HDR-Plasmid (h) und Clathrin Light Chain B/CLTB HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CLTB-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CLTB-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.