Plásmido CRISPR de Activación (h) Cks1: sc-403019-ACT

CKS1B codifica Cks1, una subunidad reguladora conservada de las quinasas dependientes de ciclina que coordina la progresión del ciclo celular modulando la actividad de las CDK y la selección de sustratos. Cks1 está estrechamente vinculada al control ubiquitina–proteasoma mediado por SCF(SKP2) de inhibidores del ciclo celular como CDKN1B/p27, influyendo así en la transición G1/S, la competencia replicativa y la fidelidad de los puntos de control. A través de estas interacciones, CKS1B contribuye a redes de señalización proliferativa que se entrecruzan con las respuestas al daño del ADN y el control mitótico. La expresión desregulada de CKS1B se ha asociado con fenotipos de proliferación aberrante e inestabilidad genómica que se examinan con frecuencia en contextos de investigación oncológica y de neoplasias hematológicas.

Cks1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CKS1B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cks1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CKS1B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CKS1B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cks1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CKS1B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cks1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cks1 en células tumorales con expresión de CKS1B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.